domingo, 20 de octubre de 2013
MÉTODO
EN FRESCO PARA TRICHOMONAS VAGINALIS
Introducción es un método sencillo en que se utiliza la
secreción vaginal para la observación del protozoario; trichomonas vaginalis.
La tricomoniasis urogenital es causada en el ser humano por el protozoario
trichomona vaginalis. Aunque se transmite por contacto sexual no se a
descartado que se transmite raramente por fómites.
El parasito se localiza en el tracto genital y urinario
de la mujer o del hombre, en donde puede causar vaginitis o uretritis. La
tricomoniasis es la enfermedad también de transmisión sexual no viral más
importante en el mundo.
La tricomonas pueden presentar forma piriforme, ameboide,
esferoidal, elipsoidal, u ovoidal, asociándose la forma ameboide con la
expreccion de la virulencia del paracito. A nivel nacional, la tricomoniasis a
ocupado un lugar preponderante en las primeras causas de movilidad.
El diagnostico de la tricomoniasis en la mujer se realiza
por examen directo en fresco y en en fresco de la secreción vaginal observada
en el microscopio obtenida de los fondos del saco vaginal lateral y posterior.
En el hombre, la infección usualmente es asintomática y el examen debe
realizarse de la secreción obtenida por la mañana antes de la primera mixion.
La identificación y diagnostico de las tricomonas se realiza por medio del
análisis microscópico, identificando las formas móviles del parasito
MATERIAL
Y REACTIVOS:
·
Solución salina
·
Porta objetos
·
Cubre objetos
·
Guantes
·
Espejo vaginal
·
Tubo de ensayo
·
Pipetas graduadas
·
Mesa ginecológica
·
Gradilla
·
Cubre boca
·
Microscopio
TÉCNICA:
·
Preparar los materiales para la toma de
muestra.
·
Acomodar a la paciente en posición
ginecológica.
·
Introducir el hisopo (estéril en la cavidad
vaginal de la paciente).
·
Depositar el hisopo en un tubo que contenga
un mililitro de solución salina.
·
Mezclarlo y tomar una gota de esa solución.
·
Depositarla en un portaobjeto
·
Colocar el cubre objeto sobre la muestra.
·
Observar al microscopio con objetivo de 40
MÉTODO COPROPARASITOSCÓPICO DE STOLL
I N T R O D UCCION: Norman Rudolph Stoll
uno de los fundadores de la Parasitología, llevo a cabo una investigación sobre
Parasitología en todo el mundo, relacionada con aspectos epidemiológicos de
infecciones por uncinarias.(l)
En
1923, propuso un método sencillo para contar huevos de uncinarias en la materia
fecal y además demostró que existe una relación aproximada entre el número de
huevos excretados y el número de uncinarias adultas alojadas en el intestino.(1).
Stoll desarrolló éste método cuantitativo para el conteo de huevos teniéndose
con ello un avance en el diagnóstico y empezó a conocerse su método en todo el
mundo como “técnica para el conteo de huevos por dilución de Stoll”.
MATERIAL:
-
Probetas graduadas de 100 ml con tapón esmerilado o tubos de ensaye graduados
con tapón de hule.
-
Pipetas de Stoll o pipetas graduadas de 2 ml en 0.01 ml
-
Portaobjetos de 74 X 38 mm
-
Cubreobjetos de 22 X 40 mm
-
Varillas de vidrio de 20 cm de longitud o abatelenguas
-
Perlas de vidrio de 5 mm de diámetro.
-
Gradillas para los tubos
REACTIVOS: , ; .
-
Hidróxido de sodio 0.1 N. , 19
-
Agua destilada.
E Q U I P O:
-
Microscopio compuesto.
MATERIAL BIOLÓGICO:
-Muestra
de materia fecal positiva a huevos de helmintos (una muestra).
TÉCNICA:
-
Colocar en la probeta hidróxido de sodio 0.1 N. hasta la marca de 56 ml o 14 ml
si se realiza el método modificado en tubo de ensayo.
-
Con la varilla de vidrio se añade materia fecal hasta que suba el nivel a 60 ml
en la probeta o a 15 ml en el tubo de ensayo según sea el caso.
-
Si las heces son duras, se espera unos 5 minutos hasta que se reblandezcan.
-
Se añaden de 8-12 perlas de vidrio, se tapa la probeta o el tubo de ensayo (con
el tapón de hule)
-
Se agita fuertemente de arriba a abajo durante un minuto, hasta obtener una
suspensión homogénea.
-
Los huevos y restos empiezan a precipitar en cuanto cesa la agitación.
-
Con una pipeta de Stoll o equivalente, tomar inmediatamente 0.15 o 0.075 ml de la
suspensión, llevando la punta de la pipeta al centro de la probeta ó del tubo.
El error debido a la precipitación de los huevos disminuye con éste
procedimiento.
-
Se pasa la totalidad de la muestra tomada a un portaobjetos y se coloca un
cubreobjetos.
-
Se examina la preparación sistemáticamente al microscopio con objetivo seco
débil y se cuentan todos los huevos y larvas presentes, cuidando de no contar
dos veces la misma estructura.
DESARROLLO DE LA_
PRÁTICA:
1.-Realizar
primero el examen físico de la materia fecal, para determinar la
consistencia
de la misma.
2.-Practicar
la técnica de dilución de Stoll y observar al microscopio las
Preparaciones
con el objetivo seco débil.
3.-Identificar
los huevecillos encontrados en la muestra y hacer el conteo por
separado
para cada especie de helminto.
4.-
Aplicar el factor correspondiente y reportar en h ml h.
MÉTODO DE SEDIMENTACIÓN SIMPLE EN COPAS
FUNDAMENTO: Este procedimiento de decantación en copas es una técnica farmacéutica
conocida desde muchos años en el cual se utiliza un procedimiento físico para
la separación de mezclas.
Este
método también es utilizado para el diagnostico de aquellas muestra de heces
fecales sospechosas de contener huevos de Fasciola hepatica; el método ha
demostrado ser bondadoso para otro tipo de huevos de helmintos e incluso para
quistes de protozoario. Las ventajas que tiene, sobre otro, es que hace una
concentración de volúmenes considerablemente grandes de materia fecal.
Reactivos
|
-Verde de malaquita
-Detergente
-Agua de la llave ó Agua destilada
Soluciones
|
Solución
de detergente al 5% ( Se pasan 5 g de detergente de cualquier marca y se
disuelve en 1000 ml de agua; el detergente que no se alcance a disolver, se
sedimenta y decanta el sobrenadante o se deja en el frasco donde se guarda la
solución, pues no interfiere en el proceso)
Solución
de verde de malaquita
al 1% ( Se disuelve el verde de malaquita en los 100 ml de agua y se guarda la
solución en frascos con tapón esmerilado).
Vidriería
|
-Copas
crónica
-Pipeta pasteur
-Portaobjetos
-Cubreobjetos.
-Embudo
Aparatos
|
Microscopio
compuesto
Otros
|
Aplicadores
de madera
Bulbos de caucho
Gasa
1. En el recipiente donde se llevo la muestra al
laboratorio se homogeneiza la muestra con agua de la llave y se hace pasar a
través de la gasa previamente colocada en un embudo y recibiendo la suspensión
en la copa.
2. Se colocan 5 ml de colorante y se agita con un
aplicador
3. Se agregan 5 ml de la solución de detergente y se
agita nuevamente
4. Se completa el volumen de la copa y se deja reposar
durante 15 min.
5. Se decanta el sobrenadante y se agrega mas agua,
mezclando con el aplicador y se deja reposar otros 15 min.
6. Se decanta nuevamente el sobrenadante.
7. Con la pipeta con bulbo, se toma del sedimento la
muestra que se coloca en el portaobjetos y se pone el cubreobjetos.
8. Se observa con el microscopio, usando objetivos de 10X
y 40X, cuando sea necesario.
9. Se hacen tres preparaciones de cada sedimento para
asegurar la positividad de la muestra. Cuando se tiene suficiente practica se
puede utilizar la lupa del microscopio, sobre todo cundo se busca la F.
hepatica.
MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR
SEDIMENTACIÓN RITCHIE
GENERALIDADES: En 1917 Carles y Barthelemy
describieron el primer método de concentración por sedimentación utilizando
solución salina, éter y formaldehído, años más tarde, en 1948 Ritchie describió
un método semejante, el cual hasta la fecha se sigue utilizando. En
evaluaciones comparativas con este método, se ha demostrado su utilidad para el
diagnóstico de parasitosis intestinales leves o moderadas.
El empleo de éter y
formaldehído, permite con el primero, liberar las formas parasitarias de las
grasas, por disolución de las mismas y con el formol se fijan y conservan. La
concentración se hace por centrifugaciones sucesivas. Unas ventajas que tiene
este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el
transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser
examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento
y determinación de frecuencia.
MATERIAL
Y EQUIPO
·
Microscopio
·
Centrífuga
·
Tubos de
ensaye cónicos de 15 ml
·
Gasa
cortada en cuadros de 15 cm por lado
·
Embudos
de polietileno
·
Vasos de
precipitado de 50 ml
·
Aplicadores
de madera
·
Pipetas
Pasteur con bulbo
·
Portaobjetos
de 26 X 76 mm
·
Cubreobjetos
de 22 X 22 mm
·
Solución
salina isotónica
·
Solución
de formaldehído al 10%
·
Éter
etílico comercial
METODO
1.- Con el aplicador de madera se coloca
aproximadamente 1 gr. de la materia fecal en el vaso de precipitado, se añaden
10 ml de solución salina y se homogeniza.
2.- Se filtra la suspensión a través de la gasa
colocada en el embudo, recogiendo el filtrado en el tubo cónico.
3.- Se centrífuga la suspensión durante 1 min a
2000 rpm.
4.- Se decanta el sobrenadante y se
resuspende el sedimento con solución salina, centrifugando, decantando y
resuspendiendo las veces necesarias hasta que el sobrenadante sea claro.
5.- Al último sedimento se agregan 10 ml de
solución de formaldehído al 10%, se mezcla y se deja reposar durante 10 min.
6.- Se añaden después 5 ml de éter, se tapan los
tubos con tapones de caucho y se agitan enérgicamente durante 30 segundos.
8.- Después de centrifugar se observan 4 capas:
a) éter en la superficial,
b) un tapón de restos fecales,
c) formaldehído,
d) sedimento en el fondo del tubo,
conteniendo los elementos parasitarios.
9.- Se introduce la pipeta Pasteur hasta la capa d,
se extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos.
10.-Se le añade una gota de lugol y con uno de los
ángulos del cubreobjetos, se homogeniza, cubriéndolo con el mismo.
11.-Se observa la preparación en el microscopio con
objetivos de 10X y 40X.
12.-Se anotan resultados de observación y hacer
dibujos.
MÉTODO COPROPARASITOSCÓPICO DE " K A T O ".
OBJETIVOS:
1.-
Aprender a realizar un método coproparasitoscópico cuantitativo de frotis
grueso por la técnica de Kato.
2.-
Identificar y cuantificar el número de huevecillos de helmintos por gramo de
heces.
3.-
Conocer las ventajas y desventajas del método
I N T R O D U C C I Ó
N:
En
1954 Kato y Miura Introdujeron la técnica de estudio del "frotis
grueso" con buen resultado para contar huevos de helmintos. Martín y
Beaver en 1968 desarrollaron modificaciones a ésta técnica que les permitió
retirar fibras de la materia fecal,hacer extensión uniforme del frotis y evitar
aclaraciones excesivas de la preparación. Para el diagnóstico de las
infecciones por SCHISTOSOMA MANSONI y SCHISTOSOMA HEMATOBIUM la técnica que se
usa es la del frotis grueso de Kato. Aunque no es escencial para hacer
estimaciones fiables de la producción de huevos. Kato y colaboradores
recomendaron una modificación que consiste en el empleo de un patrón
calibrador, fabricado de cartón o plástico desechables, de un grosor tal que
contenga aproximadamente 50 mg. de heces fecales. Tras presionar la muestra
fecal en el orificio, sujetando éste en el centro del portaobjetos, se retira y
se desecha el patrón, se extiende la muestra bajo una lámina de celofán y se
efectúa el recuento de huevos con la técnica habitual. Peters y colaboradores
introdujeron y probaron otra modificación denominada "Frotis rápido de
Kato’’. Una dificultad que plantea el empleo de patrones es que pueden quedar
atrapadas burbujas de aire en la muestra medida y que una gran parte de ésta
puede adherirse al patrón.
F U N D A M E N T 0:
El
fundamento de esta técnica se basa en la acción que tiene la glicerina como aclarador
de los huevos de helmintos y el verde de malaquita como colorante de contraste.
M AT E R I A L Y R E
A C T I V O S:
-
Solución de glicerina-verde de malaquita. En ésta solución se sumergen los
cubreobjetos de celofán por un mínimo de 24 hr. antes de usarlos (Aunque el verde
de malaquita reduce la potencia ocular del microscopio, pero no interfiere en
la identificación de los huevecillos).
-
Cubreobjetos de papel celofán (no adherible) de grosor medio cortados en
rectángulos de 22 X 40 mm
-
Malla de acero inoxidable de trama 105 cortada en cuadros de 4 cm de lado.
También puede utilizarse una malla de fibra sintética gruesa y de trama
similar.
-
Portaobjetos de 38 X 76 o de 26 X 76 mm
-
Aplicadores de madera,
EQUIPO:
-Microscopio
compuesto.
-Balanza
analítica.
MATERIAL BIOLÓGICO:
-
Una muestra de materia fecal positiva a huevos de helmintos.
1.-Con
un aplicador de madera se transfieren aproximadamente 50 mg. de heces a un
portaobjetos (un cubo de 4 mm. de heces pesa aproximadamente. 65 mg.). Cuando
se trata de muestras fibrosas se ponen unos 2 gr. de heces en una hoja de papel
desechable, se coloca sobre las heces un cuadro de malla y se presiona, se
retira una muestra de las heces coladas con un aplicador de madera haciendo un
raspado. Cuando las heces son compactas y duras hay que añadir algunas gotas de
agua hasta conseguir una consistencia pastosa ó pulposa.
2.-Se
pesa una muestra fecal de 50 mg y se cubre con un cubreobjetos de celofán
humedecido
previamente en la solución de glicerina-verde de malaquita, se pone la 25 preparación boca abajo en una superficie
absorbente plana, por ejemplo un papel grueso y blando, sobre una mesa, y se
presiona hasta que la película fecal cubra una área de 20-25 mm de diámetro.
Cuando la cantidad de heces situadas sobre el portaobjetos sea excesivo (suele
fluir por debajo del cubreobjetos) se desecha con el papel absorbente.
3.-Se
deja en reposo la preparación durante alrededor de 1 hr a temperatura ambiente
con una humedad relativa moderada o durante 20-30 min. En Incubadora seca a 37º
C. De ésta forma, los huevos se transparentan, y las larvas no se pueden
observar. Como con ésta técnica los huevos de uncinarias y algunas otras
especies que tienen la pared muy delicada se colapsan y desaparecen, la
preparación debe examinarse inmediatamente después de la incubación, para que
el aclarado no sea excesivo, además el procedimiento de secado puede
interrumpirse temporalmente poniendo la preparación boca abajo sobre una
superficie plana y lisa.
4.-Se
examina toda la preparación a seco débil, cambiando a seco fuerte para
identificar a los Huevecillos.
D E S A R R 0 L LO D E L A P R Á C T I C A:
a).-Realizar
primero el examen físico de las heces para determinar la consistencia.
b).-Realizar
la técnica de Kato y observar al microscopio las preparaciones.
c).-Identifique
los parásitos encontrados en la muestra.
d).-Realice
el conteo de huevecillos observados en toda la preparación, si hay más de una
especie el conteo debe hacerse por separado al igual que los cálculos.
METODO
DE GRAHAM
GENERALIDADES: técnica basada en que la hembra
adulta de Enterobius vermicularis no deposita sus huevos en el
interior del intestino, sino que por lo general emigra durante la noche,
hacia las márgenes del ano, depositando los huevos en los pliegues
perianales. Es por esto que la toma debe efectuarse en la mañana indicando que
debe ir a defecar y no debe bañarse.
Ocasionalmente se
pueden encontrar huevos de Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura,
Hymenolepis nana, Taenia sp.
MATERIAL
Y EQUIPO
·
Portaobjetos
De 26 X 76 mm
·
Abatelenguas
·
Cinta de
celulosa Scotch
·
Microscopio
METODO
1.- Sobre un extremo del
abatelenguas se coloca la cinta Scotch con la parte adherente hacia fuera,
sujetándola con los dedos pulgar e índice.
2.- Se presiona la superficie sobre la
región perianal hacia uno y otro lado, finalmente se hace un frote perianal.
3.- Separar cuidadosamente la cinta del
abatelenguas y adherirlo sobre un portaobjetos .
4.- Observar con objetivo de
10X.
fuentes consultadas
MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR CENTRIFUGACIÓN
FLOTACIÓN (FAUST)
La
técnica de Faust, muestra una buena concentración de quistes de protozoarios, así
como huevos y larvas de helmintos. Esta técnica tiene una gran ventaja, las
formas parasitarias se encuentran con facilidad, debido a que se eliminan la
gran mayoría de residuos y material orgánico que es tan común en las heces de los
carnívoros.
MATERIAL Y EQUIPO
Reactivos
y soluciones:
-Sulfato de zinc
-Lugol
-Agua destilada
Material:
v Frasco
de boca ancha con heces fecales frescas (de perro)
v Porta objetos
v Cubreobjetos
v Gradilla
v Tubos de vidrio
v Embudo
v Gasa
Equipo:
v Microscopio
v Centrifuga
Procedimiento:
C Mezclar
bien una porción de materia fecal para preparar una suspensión homogénea con 1
a 2 g de materia fecal en 10 ml de agua destilada.
C Filtrar
la suspensión a través de un colador o una gasa doblada en cuatro, en un
recipiente limpio.
C Colocar
en un tubo de ensayo la mezcla filtrada
C Centrifugar
el filtrado a 1500 rpm por 3 min.
C Decantar
el líquido sobrenadante (dejando solo el sedimento) y volver completar con agua
hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente.
C Resuspender
el sedimento.
C Repetir
el procedimiento 3-5 veces hasta que el líquido sobrenadante esté limpio.
C Decantar
nuevamente el líquido sobrenadante reemplazándolo por igual cantidad de
solución de sulfato de Zinc al 33%. Mezclar bien la solución con el sedimento.
Centrifugar durante 3 minuto a 1500 rpm.
C Colocar
el tubo de ensayo en una rejilla y agregar más solución de sulfato de zinc al
33% hasta el borde dejando un menisco convexo.
C Colocar
un cubreobjetos y esperar 10-20 min. mezclar 1-2 gotas de lugol, colocar en una
laminilla.
C Observa
en el microscopio.
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