MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR SEDIMENTACIÓN RITCHIE

GENERALIDADES: En 1917 Carles y Barthelemy describieron el primer método de concentración por sedimentación utilizando solución salina, éter y formaldehído, años más tarde, en 1948 Ritchie describió un método semejante, el cual hasta la fecha se sigue utilizando. En evaluaciones comparativas con este método, se ha demostrado su utilidad para el diagnóstico de parasitosis intestinales leves o moderadas.

     El empleo de éter y formaldehído, permite con el primero, liberar las formas parasitarias de las grasas, por disolución de las mismas y con el formol se fijan y conservan. La concentración se hace por centrifugaciones sucesivas. Unas ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

MATERIAL Y EQUIPO

·         Microscopio

·         Centrífuga

·         Tubos de ensaye cónicos de 15 ml

·         Gasa cortada en cuadros de 15 cm por lado

·         Embudos de polietileno

·         Vasos de precipitado de 50 ml

·         Aplicadores de madera

·         Pipetas Pasteur con bulbo

·         Portaobjetos de 26 X 76 mm

·         Cubreobjetos de 22 X 22 mm

·         Solución salina  isotónica

·         Solución de formaldehído al 10%

·         Éter etílico comercial

METODO

1.- Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1 gr. de la materia fecal en el vaso de precipitado, se añaden 10 ml de solución salina y se homogeniza.

2.- Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, recogiendo el filtrado en el tubo cónico.

3.- Se centrífuga la suspensión durante 1 min a 2000 rpm.

4.- Se decanta el sobrenadante  y se resuspende el sedimento con solución salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo las veces necesarias hasta que el sobrenadante sea claro.

5.- Al último sedimento se agregan 10 ml de solución de formaldehído al 10%, se mezcla y se deja reposar durante 10 min.

6.- Se añaden después 5 ml de éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan enérgicamente durante 30 segundos.

7.- Se centrífuga durante 2 minutos a 1500 rpm.

8.- Después de centrifugar se observan 4 capas:

a)    éter en la superficial,

b)    un tapón de restos fecales,

c)    formaldehído,

d)    sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios.

9.- Se introduce la pipeta Pasteur hasta la capa d, se extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos.

10.-Se le añade una gota de lugol y con uno de los ángulos del cubreobjetos, se homogeniza, cubriéndolo con el mismo.

11.-Se observa la preparación en el microscopio con objetivos de 10X y 40X.

12.-Se anotan resultados de observación y hacer dibujos.