MÉTODO COPROPARASITOSCÓPICO DE " K A T O ".

OBJETIVOS:

1.- Aprender a realizar un método coproparasitoscópico cuantitativo de frotis grueso por la técnica de Kato.

2.- Identificar y cuantificar el número de huevecillos de helmintos por gramo de heces.

3.- Conocer las ventajas y desventajas del método

I N T R O D U C C I Ó N:

En 1954 Kato y Miura Introdujeron la técnica de estudio del "frotis grueso" con buen resultado para contar huevos de helmintos. Martín y Beaver en 1968 desarrollaron modificaciones a ésta técnica que les permitió retirar fibras de la materia fecal,hacer extensión uniforme del frotis y evitar aclaraciones excesivas de la preparación. Para el diagnóstico de las infecciones por SCHISTOSOMA MANSONI y SCHISTOSOMA HEMATOBIUM la técnica que se usa es la del frotis grueso de Kato. Aunque no es escencial para hacer estimaciones fiables de la producción de huevos. Kato y colaboradores recomendaron una modificación que consiste en el empleo de un patrón calibrador, fabricado de cartón o plástico desechables, de un grosor tal que contenga aproximadamente 50 mg. de heces fecales. Tras presionar la muestra fecal en el orificio, sujetando éste en el centro del portaobjetos, se retira y se desecha el patrón, se extiende la muestra bajo una lámina de celofán y se efectúa el recuento de huevos con la técnica habitual. Peters y colaboradores introdujeron y probaron otra modificación denominada "Frotis rápido de Kato’’. Una dificultad que plantea el empleo de patrones es que pueden quedar atrapadas burbujas de aire en la muestra medida y que una gran parte de ésta puede adherirse al patrón.

F U N D A M E N T 0:

El fundamento de esta técnica se basa en la acción que tiene la glicerina como aclarador de los huevos de helmintos y el verde de malaquita como colorante de contraste.

M AT E R I A L Y R E A C T I V O S:

- Solución de glicerina-verde de malaquita. En ésta solución se sumergen los cubreobjetos de celofán por un mínimo de 24 hr. antes de usarlos (Aunque el verde de malaquita reduce la potencia ocular del microscopio, pero no interfiere en la identificación de los huevecillos).

- Cubreobjetos de papel celofán (no adherible) de grosor medio cortados en rectángulos de 22 X 40 mm

- Malla de acero inoxidable de trama 105 cortada en cuadros de 4 cm de lado. También puede utilizarse una malla de fibra sintética gruesa y de trama similar.

- Portaobjetos de 38 X 76 o de 26 X 76 mm

- Aplicadores de madera,

EQUIPO:

-Microscopio compuesto.

-Balanza analítica.

MATERIAL BIOLÓGICO:

- Una muestra de materia fecal positiva a huevos de helmintos.

TÉCNICA:

1.-Con un aplicador de madera se transfieren aproximadamente 50 mg. de heces a un portaobjetos (un cubo de 4 mm. de heces pesa aproximadamente. 65 mg.). Cuando se trata de muestras fibrosas se ponen unos 2 gr. de heces en una hoja de papel desechable, se coloca sobre las heces un cuadro de malla y se presiona, se retira una muestra de las heces coladas con un aplicador de madera haciendo un raspado. Cuando las heces son compactas y duras hay que añadir algunas gotas de agua hasta conseguir una consistencia pastosa ó pulposa.

2.-Se pesa una muestra fecal de 50 mg y se cubre con un cubreobjetos de celofán

humedecido previamente en la solución de glicerina-verde de malaquita, se pone la  25 preparación boca abajo en una superficie absorbente plana, por ejemplo un papel grueso y blando, sobre una mesa, y se presiona hasta que la película fecal cubra una área de 20-25 mm de diámetro. Cuando la cantidad de heces situadas sobre el portaobjetos sea excesivo (suele fluir por debajo del cubreobjetos) se desecha con el papel absorbente.

3.-Se deja en reposo la preparación durante alrededor de 1 hr a temperatura ambiente con una humedad relativa moderada o durante 20-30 min. En Incubadora seca a 37º C. De ésta forma, los huevos se transparentan, y las larvas no se pueden observar. Como con ésta técnica los huevos de uncinarias y algunas otras especies que tienen la pared muy delicada se colapsan y desaparecen, la preparación debe examinarse inmediatamente después de la incubación, para que el aclarado no sea excesivo, además el procedimiento de secado puede interrumpirse temporalmente poniendo la preparación boca abajo sobre una superficie plana y lisa.

4.-Se examina toda la preparación a seco débil, cambiando a seco fuerte para identificar a los Huevecillos.

D E S A R R 0 L LO D E L A P R Á C T I C A:

a).-Realizar primero el examen físico de las heces para determinar la consistencia.

b).-Realizar la técnica de Kato y observar al microscopio las preparaciones.

c).-Identifique los parásitos encontrados en la muestra.

d).-Realice el conteo de huevecillos observados en toda la preparación, si hay más de una especie el conteo debe hacerse por separado al igual que los cálculos.